使用自動(dòng)細胞計數器的三個(gè)tip

使用自動(dòng)細胞計數器的三個(gè)tip

市場(chǎng)上近幾年涌現出不少自動(dòng)細胞計數器。這種儀器利用光學(xué)顯微鏡技術(shù)，但帶來(lái)了更高的準確性、重復性，并將這一單調的工作自動(dòng)化。樣品體積小也是這種細胞計數器的額外優(yōu)勢。許多儀器使用一次性的玻片，只需要10-20 uL樣品。將玻片插入自動(dòng)細胞計數器中，照相機捕獲圖像。隨后內置的軟件分析圖像，顯示細胞數量等信息。
在此，專(zhuān)家介紹了使用自動(dòng)細胞計數器的三個(gè)tip。
準確對焦
與其他光學(xué)顯微鏡一樣，儀器的準確對焦對于計數很關(guān)鍵。在手動(dòng)計數時(shí)，訓練有素的大腦可輕松鑒定細胞。然而，自動(dòng)細胞計數器內的照相機檢測活細胞的亮中心和暗邊緣，將其處理成黑白像素信息。如果細胞未準確對焦，那么亮中心將有明顯的灰度，會(huì )被誤認為是死細胞。
大部分研究人員將會(huì )發(fā)現對焦并不難，只要顯示在屏幕上的圖像質(zhì)量與傳統的顯微鏡相似。確保你有一張清晰的圖像，這很重要。另一點(diǎn)是要了解細胞計數器中照相機的分辨率。如果自動(dòng)細胞計數器以低的幀速顯示，如每秒小于15幀，那么顯示的圖像將不能實(shí)時(shí)響應聚焦旋鈕的微調。
控制玻片之間的差異
大部分基于圖像的自動(dòng)細胞計數器都使用一次性的玻片，其上有明確的測量區域。這一測量區域被物鏡的放大率和照相機的圖像傳感器大小所設定。這些細胞計數器通常測定0.4-0.5 uL樣品，相當于血球計數器的4-5個(gè)大方格。
與血球計數器不同，計數玻片通常只使用一次。因此，玻片之間的差異會(huì )顯著(zhù)影響細胞計數的結果。對于某一組實(shí)驗，好使用同一批號的玻片，盡量避免這些差異。在更換批號時(shí)，也建議用標準的微珠來(lái)檢驗玻片。大部分細胞計數器制造商都提供已知濃度的標準微珠。使用相同的微珠樣品來(lái)檢驗不同的玻片，將有助于發(fā)現差異。
評估軟件的分簇性能
自動(dòng)細胞計數器的核心是開(kāi)展分析的軟件，它相當于手動(dòng)計數時(shí)的人腦。大部分的自動(dòng)細胞計數器包含集成軟件，能準確地計算單細胞群體的數量。然而，在談到成簇細胞的計數時(shí)，細胞計數器就會(huì )存在明顯差異。由于從培養細胞中獲得的樣品并不總是單細胞群體，因此，有時(shí)會(huì )有多個(gè)細胞團塊，而自動(dòng)細胞計數器的分簇（declustering）性能也仔細評估。評估分簇性能時(shí)可開(kāi)展圖1的檢測。
圖1. 將HL-60細胞加熱到70°C，處理20分鐘，殺死細胞，獲得死細胞樣品。隨后利用兩款不同的自動(dòng)細胞計數器進(jìn)行樣品的檢測。在細胞計數之后，根據軟件捕獲的圖像進(jìn)行比較。紅色圓圈：死細胞；藍色圓圈：活細胞；黑色圓圈：排除的對象。
自動(dòng)細胞計數器正在取代單調乏味的手動(dòng)計數方法。隨著(zhù)對一些基本原理的了解，自動(dòng)細胞計數器將幫助你獲得佳的結果。